In den letzten 15 Jahren hat sich die Labordiagnostik von Leukämien und Lymphomen mit hoher Geschwindigkeit weiterentwickelt. Großen Anteil an diesen Fortschritten haben zum einen das zunehmende Verständnis von pathophysiologischen Zusammenhängen bei diesen Erkrankungen und zum anderen die Weiterentwicklung von Labortechniken und Geräten inklusive computergestützter Verfahren der Auswertung von Befunden. Für eine umfassende Diagnose, eine möglichst zielgerichtete Therapie und die letztlich bestmögliche Prognose ist es daher unbedingt erforderlich, die zur Verfügung stehenden Methoden gezielt und kosteneffektiv einzusetzen.
Um diesen hohen Anforderungen gerecht zu werden und den interessierten Lesern eine kompetente Hilfestellung und aktuelle Orientierung für die Routinediagnostik von Leukämien und Lymphomen zu geben, wurde dieses Buch erarbeitet. Es erscheint mittlerweile in einer 3. erweiterten Auflage, der die WHO-Klassifikation von 2008 zugrunde gelegt und die durch weitere Erkenntnisse der letzten drei Jahre ergänzt wurde. Es erlaubt eine rasche Orientierung ebenso wie ein gezieltes Nachlesen genauerer Zusammenhänge.
विषयसूची
1.Allgemeine Aspekte zur Labordiagnostik bei Leukämien und Lymphomen14
1.1.Materialgewinnung14
1.1.1.Knochenmarkbiopsie und Aspiration14
1.1.2.Entnahmeort14
1.1.2.1.Knochenmarkbiopsie15
1.1.2.2.Knochenmarkaspirate15
1.2.Probenverteilung16
1.3.Lymphknotenentnahme16
1.4.Liquorpunktion16
2.Zytomorphologische Diagnostik20
2.1.Untersuchung des peripheren Blutes20
2.2.Untersuchung von Knochenmarkaspiraten21
2.2.1.Verarbeitung und Auswertung der KM-Aspirate21
2.3.Klassifikation von Leukämien und MDS24
2.4.Beurteilung des Remissionsstatus bei Leukämien und Lymphomen27
3.Hämatologieautomaten30
3.1.Einführung30
3.2.Das kleine Blutbild30
3.3.Einfluss- und Störgrößen des kleinen Blutbildes32
3.4.Differentialblutbild34
3.5.Bestimmung der Retikulozyten35
4.Die beckenkammbioptische Diagnostik38
4.1.Die Knochenmarkdiagnostik im historischen Kontext38
4.2.Histotechnische Voraussetzungen38
4.2.1.Kunststoffeinbettung von Beckenkammbiopsien39
4.2.2.Paraffineinbettung von Beckenkammbiopsien39
4.2.2.1.Prinzipielle Vorteile einer Paraffineinbettung39
4.2.2.2.Typische Artefakte39
4.2.2.3.Empfohlene Fixationen41
4.2.2.4.Neutrale Chelatentkalkung41
4.2.2.5.Paraffineinbettung, Färbungen42
4.3.Algorithmus der beckenkammbioptischen Diagnostik46
4.3.1.Implikationen der Dimension von Beckenkammbiopsien46
4.3.2.Osteologische Befundkomponenten47
4.3.3.Fettzellen und allgemeine Zelldichte des Knochenmarks47
4.3.4.Retikulinfasern – Fibrose48
4.3.5.Eisengehalt des Knochenmarks48
4.3.6.Zytologische Analyse von Knochenmarkschnitten51
4.4.Histologie versus Zytologie51
4.4.1.Sampling error der Markaspiration bei fokaler Markfibrose52
4.4.2.Nachweis fragiler Zellen in der Beckenkammbiopsie52
4.4.3.Mark-Knochen- und Knochen-Mark-Wechselwirkungen52
4.4.3.1.Hyperkalzämiesyndrome52
4.4.3.2.Osteopetrose53
4.4.3.3.Ostitis deformans Paget53
4.4.4.Nachweis von Tumormetastasen54
4.4.5.Histotopographie der neoplastischen Hämatopoese55
4.5.Lymphatische Strukturelemente und Lymphome im Knochenmark56
4.5.1.Nicht neoplastische lymphatische Zellen im Knochenmark56
4.5.1.1.Diffus verteilte Lymphozyten56
4.5.1.2.Perimetarterioläre Plasmazellen57
4.5.1.3.Marklymphknötchen58
4.5.2.Histotopographische Typologie der Lymphome im Knochenmark65
4.5.2.1.Intrasinusoidale Lymphome66
4.5.2.2.Perisinusoidale Lymphome66
4.5.2.3.Perimetarterioläre Lymphome68
4.5.2.4.Paratrabekuläre Lymphome72
4.5.2.5.Paratrabekuläre Lymphome mit osteoklastischer Reaktion73
4.5.2.6.Peritrabekuläre Lymphome74
4.5.2.7.Ungeordnet interstitielle Lymphome75
4.5.2.8.Ungeordnet tumorbildende Lymphome76
4.5.3.Diskordante Lymphome78
4.5.4.Kombinierte Lymphome – Composite lymphoma78
5.Immunphänotypisierung88
5.1.Einführung88
5.2.Methodik der Immunphänotypisierung mittels multiparametrischer
Durchflusszytometrie (MFC)88
5.2.1.Unterscheidung verschiedener Populationen anhand ihrer Streulichteigenschaft88
5.2.2.Einsatz fluoreszenzmarkierter monoklonaler Antikörper89
5.2.3.CD45-Gating90
5.2.4.Multiparametrische Durchflusszytometrie90
5.2.5.Probenaufarbeitung91
5.2.6.Verwendung unterschiedlicher Antikörperpanel91
5.3.Anwendung der Immunphänotypisierung in der Diagnostik91
5.3.1.Akute Leukämien91
5.3.1.1.Akute lymphatische Leukämie (ALL)92
5.3.1.1.1.Pro-B-ALL93
5.3.1.1.2.Common-ALL (c-ALL)93
5.3.1.1.3.Prä-B-ALL93
5.3.1.1.4.Reife B-ALL93
5.3.1.1.5.Pro-T-ALL93
5.3.1.1.6.Prä-T-ALL93
5.3.1.1.7.Kortikale T-ALL93
5.3.1.1.8.Reife T-ALL93
5.3.1.2.Akute myeloische Leukämie (AML)93
5.3.1.3.Akute Leukämie mit gemischtem Phänotyp94
5.3.2.Myelodysplastische Syndrome (MDS)95
5.3.3.Chronische myeloische Leukämie (CML)95
5.3.4.Reife B-Zell-Neoplasien95
5.3.4.1.B-CLL und B-PLL95
5.3.4.2.Marginalzonenlymphom und verwandte B-Zell-Neoplasien96
5.3.4.3.Haarzellleukämie97
5.3.4.4.Plasmozytom97
5.3.4.5.Follikuläres Lymphom97
5.3.4.6.Mantelzelllymphom97
5.3.4.7.Diffus großzelliges B-Zell-Lymphom97
5.3.4.8.Burkitt-Lymphom97
5.3.5.T-Zell- und NK-Zell-Neoplasien97
5.3.5.1.T-Zell- und NK-Zell-large granular lymphocytic (LGL)-Leukämie98
5.3.5.2.Mycosis fungoides, Sezary-Syndrom98
5.3.5.3.T-Prolymphozytenleukämie (T-PLL)98
5.3.6.PNH98
5.4.Monitoring minimaler Resterkrankung (MRD)98
5.4.1.MRD bei ALL99
5.4.2.MRD bei AML100
5.4.3.MRD bei CLL101
6.Zytogenetik und Fluoreszenz-in situ-Hybridisierung104
6.1.Chromosomenanalyse104
6.1.1.Bedeutung der Chromosomenanalyse, Indikation104
6.1.2.Untersuchungsmaterial104
6.1.3.Konventionelle Chromosomenanalyse mittels Bänderungstechniken104
6.2.Fluoreszenz-in situ-Hybridisierung (FISH)104
6.2.1.Interphase-FISH105
6.2.2.Metaphasen-FISH106
6.2.2.1.24 Farben-FISH106
6.2.3.Komparative genomische Hybridisierung (CGH)106
6.3.Nomenklatur107
6.3.1.Chromosomenanalyse107
6.3.2.Fluoreszenz-in situ-Hybridisierung an Interphasekernen109
6.4.Charakteristische zytogenetische Veränderungen bei der AML110
6.4.1.De novo-AML110
6.4.2.Sekundäre, therapieassoziierte AML112
6.5.Charakteristische zytogenetische Veränderungen bei der ALL113
6.6.Charakteristische zytogenetische Veränderungen bei der CML114
6.6.1.Primärdiagnostik114
6.6.2.Zytogenetische Befunde zur Therapiekontrolle114
6.7.Charakteristische zytogenetische Veränderungen bei der CLL115
6.8.Charakteristische zytogenetische Veränderungen bei NHL116
7.Molekulargenetik120
7.1.Einleitung120
7.2.Molekulare Methoden in der Diagnostik von Leukämien und Lymphomen120
7.2.1.Southern Blot120
7.2.2.Polymerasekettenreaktion (PCR)121
7.2.2.1.Nested PCR123
7.2.2.2.Fragmentanalyse (Genescan)123
7.2.2.3.Chimärismusanalysen mittels Mikrosatelliten-Polymorphismen124
7.2.2.4.Real-Time-PCR124
7.2.3.Verfahren für Mutationsscreenings126
7.2.4.Sequenzanalyse nach SANGER127
7.2.5.Next Generation Sequencing127
7.3.Einsatz der molekularen Methoden bei Diagnose und im Krankheitsverlauf129
7.3.1.Molekulare Methoden bei Diagnose129
7.3.2.Remissionskontrollen mittels unterschiedlicher molekularer Techniken129
7.3.3.Probenmaterial131
7.4.Diagnostik der AML132
7.4.1.Nachweis von Fusionsgenen132
7.4.2.Molekulare Mutationen bei der akuten myeloischen Leukämie (AML)132
7.4.3.Remissionskontrollen bei der AML134
7.5.Molekulare Diagnostik bei Myelodysplastischen Syndromen (MDS)135
7.5.1.Nachweis von Deletionen bei MDS135
7.5.2.Nachweis von Fusionsgenen bei MDS135
7.5.3.Molekulare Mutationen bei den MDS136
7.5.4.Verlaufsmarker beim MDS136
7.6.MDS/MPN-Overlap-Erkrankungen und CMML137
7.7.Diagnostik der CML137
7.7.1.Verlaufskontrollen bei der CML137
7.7.2.Tyrosinkinaseinhibitor-Resistenzen bei der BCR-ABL1-positiven Leukämie138
7.7.3.Entstehung anderer Mutationen bei der Transformation in eine Blastenkrisen138
7.8.Andere myeloproliferative Neoplasien138
7.8.1.Polycythaemia vera139
7.8.2.Essentielle Thrombozythämie139
7.8.3.Primäre Osteomyelofibrosen139
7.9.Lymphatische Leukämien und Lymphome139
7.9.1.Nachweis von Fusionsgenen bei der ALL140
7.9.2.Nachweis von Genmutationen bei der ALL140
7.9.3.Verlaufskontrollen bei der ALL141
7.10.Molekulargenetik bei Lymphomen142
7.10.1.Chronische lymphatische Leukämie (CLL)142
7.10.1.1.Deletionen bei der CLL142
7.10.1.2.Genrearrangements bei der CLL142
7.10.1.3.Molekulare Mutationen bei der CLL142
7.10.1.4.VH-Hypermutationen bei der CLL142
7.10.2.Mantelzelllymphom (MCL)143
7.10.3.Follikuläres Lymphom (FL)143
7.10.4.MALT-Lymphome143
7.10.5.Lymphoplasmozytisches Lymphom/Immunozytom (LPL)143
7.10.6.Andere Marginalzonen-B-Zell-Lymphome144
7.10.7.Haarzell-Leukämie144
7.10.8.Plasmozytom144
7.10.9.Burkitt-Lymphom144
7.10.10.Zusammenfassung für die Molekulargenetik bei Lymphomen144
8.Genexpressionsanalysen154
8.1.Microarrays154
8.2.Methodische Grundlagen154
8.3.Untersuchungsmaterial155
8.4.Präparation155
8.5.Signaldetektion und Datenerfassung155
8.6.Datenanalyse und Visualisierung156
8.7.Klassifikation158
8.8.Bisherige Studien159
8.9.Limitation162
8.10.Zusammenfassung162
8.11.Ausblick162
9.Anhang166
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